游离DNA提取试剂盒的操作手段

　　近几年来，随着基因诊断技术的发展，游离DNA的应用价值越来越大，如优生筛查、肿瘤早期诊断、遗传病检测和病原体感染基因检测等。游离DNA是存在于血液(血浆或血清)、脑脊液等体液中的细胞外DNA，也叫循环DNA。其主要是由单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成，以DNA和蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在。分析血液中肿瘤特异性的胞外DNA片段可对普通血液样品进行特异性地肿瘤类型检测。游离DNA提取试剂盒的操作手段你知道吗？
 

　　1. 请自行准备：无水乙醇、1.5mL离心管。
 

　　2. 取出洗涤液，按以下操作：
 

　　a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。 b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。 c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
 

　　3. 取1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLDNA Carrier混合均匀，加入300μL 裂解液及20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴10 分钟。
 

　　4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
 

　　5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液；
 

　　6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。
 

　　7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
 

　　8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
 

　　9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
 

　　10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入30-50 μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。